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更新時間:2018-10-25
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C127(小鼠乳腺癌細胞)細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
EJ(人膀胱細胞)5×106cells/瓶×2
人腦靜脈血管內細胞*培養基100mL
血粉蛋白胨BR250克國產/進口
HLF-a(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
人視網膜muller細胞*培養基100mL
氫卵磷脂(大豆)/大豆氫卵磷脂/氫大豆卵磷脂/HSPCBR,PC=95%1公斤國產/進口
MDA231/腺細胞株國產
Du145/前列腺細胞株國產
L-Glutamine規格:100g
北沙參亞碲酸鈉胨水培養基基礎/Beisachang Sodium Tellurite Broth Base用于金黃色葡萄球菌的增菌培養,每100ml培養基需另加入1%亞碲酸鈉0.2ml250克國產/進口
匹克氏肉湯基礎/匹克氏肉湯基礎A/Picks Broth Base/Pick,s Broth Base A溶血性鏈球菌的增菌培養250克國產/進口
RS1(大鼠膚成纖維樣細胞)5×106cells/瓶×2
RSC96(大鼠雪旺細胞)5×106cells/瓶×2
C127(小鼠乳腺癌細胞)100 mgCollagenase B, 100mg
100 mgCollagenase D, 100mg
10 mgDAPI
1 kit (25 tailing reactions)DIG Oligo Tailing Kit, 2nd gen
200 µg (lyo.)Anti-HA (12CA5) 200 ug
50 µgAnti-HA High Affinity (3F10),
200 µgAnti-GFP
2.5 gCollagenase D, 2.5g, non-steri
C127(小鼠乳腺癌細胞)細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。